研究人员首先利用CyTOF跟踪了小鼠对减毒李斯特菌(LADD)感染的反应。UMAP 可视化显示 LADD 感染小鼠的CD8+T细胞分为效应T细胞(Teff)和效应记忆T细胞(TEM)。CyTOF识别出在 LADD感染后扩张的V 5.1/2+和V 12+ CD8+T细胞，以及V 14+CD8+ T细胞和V 13+V 2+ CD4+T细胞。这些T细胞分别识别李斯特菌来源的LLO蛋白和流感病毒NP蛋白的特定表位。CyTOF还可以识别表达特定V 链的调节性T细胞(Treg)的扩张，这有助于我们更好地理解Treg细胞在免疫反应中的作用。

研究人员将CyTOF与TCR-seq和scRNA-seq等技术进行比较，验证CyTOF分析TCR使用情况的有效性，发现CyTOF 与TCR-seq分析结果一致，均显示LADD感染小鼠中SIINFEKL特异性CD8+ T细胞使用 V 14 链。此外，CyTOF和scRNA-seq均发现LADD感染小鼠的 CD8+T细胞使用V 14链和V 2.1链，并与TCR-seq结果一致。比较分析发现CyTOF的TCR赋能效率高于scRNA-seq，但受限于可用的抗体试剂。

为了探讨OVA表达在中是否会导致V 14+ CD8+ T 细胞的扩张，类似于 LADD 感染。研究人员在表达OVA的B16F10-OVA肿瘤模型中，发现V 14+ CD8+ T细胞在肿瘤和肿瘤引流淋巴结中扩张。这些T细胞识别OVA抗原，类似于LADD感染，表明V 14+CD8+T细胞可以识别肿瘤抗原，并可能在中发挥作用。

研究人员进一步利用CyTOF技术追踪小鼠对流感病毒感染的反应，发现流感感染导致 CD8+ 和CD4+ T细胞激活并增殖，并分化为Teff和TEM细胞。CyTOF识别出流感特异性 T细胞，包括识别NP蛋白和PA蛋白表位的CD8+ T细胞，以及扩张的V 14+ CD4+ T细胞和V 9+Treg 细胞。最后，研究人员探讨了预防性流感疫苗接种和恢复期血清转移对流感感染后T细胞反应的影响。研究发现，预防性疫苗接种可以促进TRM细胞的形成，而恢复期血清转移则抑制CD8+T细胞的扩张并改变其分化状态。

总而言之，本研究表明CyTOF是一种强大的工具，可以用于深入解析T细胞反应和TCR 库变化。CyTOF的应用将有助于我们更好地理解免疫系统的复杂性和动态变化，并开发新的免疫治疗方法。